ПОЛУЧЕНИЕ 4%-ГО РАСТВОРА ГЕНТАМИЦИНА СУЛЬФАТА

Содержание 
  
1. Введение                                                                                                                 
2. Химическая схема производства                                                                       
3. Изложение технологического процесса                                                            
3.1. Приготовление посевного материала на агаризованной среде   
4. Приготовление агаризованной питательной среды                            
5.Фармакологические свойства гентамицина сульфата                                    
6. Изложение технологического процесса                                                            
6.1. Подготовка производственных помещений                                       
6.2. Подготовка воздуха для "чистых" помещений                                              
7. Приготовление воды                                                                                             
7.1. Приготовление воды очищенной                                                                     
7.2. Приготовление воды для инъекций                                                                 
8. Подготовка ампул                                                                                                  
9. Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата                            
9.1.Растворение субстанции гентамицина сульфата                                         
9.2. Подготовка установки стерилизующей фильтрации                                    
10. Предварительная фильтрация                                                                         
11. Стерилизующая фильтрация 4%-го раствора гентамицина 
   сульфата                                                                                                                
11.1. Подготовка установки стерилизующей фильтрации                                  
11.2. Проведение процесса стерилизующей фильтрации                                 
12. Розлив препарата в ампулы и запайка                                                            
12.1. Подготовка установки розлива и запайки                                                    
12.2. Проведение процесса розлива и запайки                                       
13. Стерилизация ампул с препаратом                                                                  
14. Проверка ампул на герметичность                                                                  
15. Просмотр ампул                                                                                                   
16. Оформление готовой продукции                                                                      
17. Список использованной литературы                                                                
  
1. Введение 
  
Гентамицин сульфат представляет собой смесь гентамицинов С 1 ,С 2 ,С 3 продуцируемых Micromonospora purpurea и обладающих антимикробным действием 
Препарат представляет собой пористую массу или порошок белого цвета с кремовым оттенком. Гигроскопичен, слегка растворим в воде, практически нерастворим в 95% спирте, хлороформе, эфире 
Препарат дает характерную реакцию на сульфаты 
Содержание сульфатов в препарате в пересчете на сухое вещество должно быть от 31 до 34% 
  
2.Химическая схема производства 
  
В основу положен метод ионообменной хроматографии 
  
Сорбция гентамицина катионитом КБ-2 из водного раствора 
Вымывание гентамициноподобных примесей 0.043Н водным раствором аммиака 
Десорбция гентамицина 5% водным раствором аммиака 

3. Изложение технологического процесса. 
  
3.1.Приготовление посевного материала на агаризованной среде. 
  
     Исходной в производстве является культура Micromonospora purpurea штамм   ВНИИА-72, выращенной из почвенной культуры в пробирках на скошенной агаризованной среде Гаузе-1 
Загружено: 
Споровая суспензия – 10 см 3 
Агар микробиологический – 50 гр 
Калий азотнокислый – 2.5 гр 
Калий фосфорнокислый двузамещенный – 1.25гр 
Магний сернокислый 7-водный – 1.25 гр 
Натрий хлористый 
для агаризованных сред – 1.25 гр 
для ферментационных сред – 18.0 гр 
Железо сернокислое, 7-водное – 0.025 гр 
Крахмал картофельный пищевой 
для агаризованных сред – 50 гр 
для посевных сред – 66 гр 
для ферментационных сред – 300 гр 
Экстракт кукурузный сгущенный – 13.75 гр 
Мука соевая дезодорированная необезжиренная 
для посевных сред – 27.5 гр 
для ферментационных сред – 180 гр 
Мел химически осажденный 
для посевных сред – 8.25 гр 
для ферментационных сред – 42.00 гр 
Аммоний сернокислый – 18.00 гр 
Кобальт хлористый без никеля 6-водный – 0.0048 гр 
Почва садово-огородная – 10 см 3 
Вода питьевая 
для агаризованных сред – до 2500 см 3 
для посевных сред – до 2750 см 3 
для ферментационных сред – до 6000см 3 
  
4.Приготовление агаризованной питательной среды 
  
Для выращивания продуцента гентамицина используется агаризованная среда Гаузе-1 следующего состава (%): 
Калий азотнокислый – 0.10; 
Калий фосфорнокислый двузамещенный – 0.05; 
Магний сернокислый – 0.05; 
Натрий хлористый – 0.05; 
Железо ( II )-сернокислое – 0.05; 
Крахмал картофельный – 2.0; 
Агар – 2.0; 
Вода питьевая – до расчетного объема; 
  
pH после стерилизации – 7.0-7.4 
  
Посевной материал, полученный в маточной колбе должен удовлетворять следующим требованиям. Внешний вид: средней густот или густая биомасса хлопьевидного мицелия, равномерно распределенного в среде. При взбалтывании мицелий обволакивает стенки колб. При отстаивании не расщепляется и не оседает. Посевной материал про мере развития образует налет, который изменяется от бежевого до сероватого, грязно-розового. Микроскопия: сетка рыхлых микроколоний, гифы длинные или средней длины, волнистые. Протоплазма базофильная, иногда в виде пунктира. Постороння микрофлора отсутствует.     

5.Фармакологические свойства гентамицина сульфата 
  
Гентамицина сульфат – антибиотик из группы аминогликозидоов, характеризующийся щироким спектром антимикробного действия 
Активен в отношении большинства грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов: синегнойной и кишечной палочек, тифо-паратифозной и дизентерийной бактерий, в том чеисле множественно устойчивого стафилококка. 
По степени активности в отношении этих микроорганизмов превосходит канамицин, неомицин, мономицин. 
Наиболее важной особенностью гентамицина является его активность в отношении штаммов синегнойной палочки. Для подавления роста большинства штаммов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов требуется концентрация не более 4 мкг × см 3 . 
На микробную клетку гентамицин действует бактерицидно, подавляя синтез белка в размножающихся клетках. 
При приеме внутрь гентамицин практически не всасывается. Основной метод введения антибиотика – парентеральный (внутримышечный и внутривенный). 
Гентамицина сульфат применяется при лечении тяжелых гнойно-септических заболеваний (сепсис, менингит, перитонит, септический эндокрит), тяжелых инфекционно-воспалительных заболеваний органов дыхания (пневмония, эмпиелоплевра, абсцесс легкого), инфекций почек и мочевыводящих путей (пиелонефрит, цистит, уретрит), инфицированных ожогов при нечувствительности к другим антибактериальным препаратам. 
  
Нормативные требования к упаковке, маркировке, транспортированию, условиям хранения и сроки годности препарата. 
  
Препарат разливают по 2 см 3 в ампулы из нейтрального стекла НС-1 или НС-3 по ОСТ 64-2-485-85. 
По 10 ампул помещают в коробки из картона для потребительской тары марки хромовой или хром-эрзац по ГОСТ 7933-89 с вкладыщем из бумаги пачечной по ГОСТ 6290-74. В каждую коробку вкладывается нож для вскрытия ампул по ТУ-400-6-169-85 или скарификатор ампульный керамический по ТУ-9432-001-07610517-97, вкладыш. 
Групповая упаковка и транспортная тара в соответствии с ГОСТ-17768-90. 
На каждой ампуле быстрозакрепляющейся   краской по ТУ-64-7-88-86 указывают название препарата, концентрацию, объем препарата   номер серии. 
При получении гентамицина сульфата 4% для инъекцтй химическая схема производства не предусмотрена. 

  
6.Изложение технологического процесса 
  
6.1.Подготовка производственных помещений. 
  
Участок готовых лекарственных сред (ГЛС) по классу чистоты разделяют на: 
блок мойки ампул – 3-й класс чистоты (В); 
блок стерилизации фильтров – 2-й класс чистоты (А,В); 
блок проверки ампул на герметичность – 4-й класс чистоты; 
блок просмотра ампул, маркировки ампул, упаковки – 4-й класс чистоты; 
  
Подготовка помещений делится на ежедневную и генеральную. 
Ежедневную подготовку помещений 1-го и 2-го классов чистоты проводят перед началом и после окончания каждой смены влажным способом. Стены, двери и другие поверхности помещения протирают поролоновой губкой, обильно смоченной раствором перекиси водорода (массовая доля 3%). 
После окончания обработки помещение освобождают от персонала и включают настенные бактерицидные лампы на 2 часа. Не менее чем за 30 минут включают проточную вентиляцию. В случае обнаружения в воздухе помещения грибков, массовую долю перекиси водорода увеличивают до 4%, а при наличии спорообразующей микрофлоры – до 6%. 
Если в течении месяца при систематическом использовании указанного раствора состав воздушной среды помещения соответствует требуемому классу чистоты, то массовую долю перекиси водорода в растворе уменьшают до 1%. 
Ежедневную подготовку производственных помещений 3-го и 4-го классов чистоты проводят аналогичным образом раствором перекиси водорода (1%) с моющим средством. 
Генеральную подготовку помещений 1-го и 2-го классов чистоты проводят влажным способом один раз в 5-6 дней. Стены, двери, потолки и другие поверхности орошают из распылителя 6%-ным раствором перекиси водорода с моющим средством из расчета 150-200 см 3 /м 2 . После окончания орошения помещение закрывают на 30-40 минут, после чего удаляют избыток раствора. 
После окончания обработки включают бактерицидные лампы на 10-12 часов. Не менее, чем за 30 минут до окончания обработки включают проточную вентиляцию. 
Генеральную подготовку помещения 3 и 4 классов чистоты проводят раствором перекиси водорода (3%) с моющим средством. Стены, двери и другие поверхности помещения протирают губкой из расчета 100-150 см 3 /м 2 . 
Определение микробной контаминации помещения и оборудования и механических частиц в воздухе проверяют выборочно два раза в неделю во время производственного процесса и 1 раз в две недели непосредственно после обработки помещений и оборудования дезинфицирующим раствором. Результаты контроля заносят в журнал. 
  
6.2.Подготовка воздуха для "чистых" помещений. 
  
Воздух, подаваемый в чистые помещений, подвергается трехступенчатой очистке 
Система проточной вентиляции состоит из следующих элементов: 
приточной камеры; 
фильтров первой ступени; 
калорифера; 
вентилятора; 
воздуховодов; 
гермоклапанов; 
фильтров второй ступени; 
фильтров третьей ступени; 
  
На первой ступени применяют ячейковые фильтры, типа ФЯП, на второй – фильтры тонкой очистки, типа ФТО, на третьей – ячейковые фильтры Нера 
В системе подготовки воздуха используются воздуховоды, клапаны и другие элементы из следующих материалов: 
из стали 3 – от калорифера до фильтров второй ступени; 
из оцинкованной стали – от фильтров второй ступени до фильтров 3-й ступени; 
  
С целью регулирования расхода воздуха, подаваемоого в рабочую зону "чистых" помещений со скоростью 0.3-0.6 м/с, устанавливаются гермоклапаны с ручным приводом. Кратность воздухообмена в "чистых" помещениях 2-го и 3-го классов чистоты устанавливаются в соответствии с МУ 42-5-1-93. 
Производительность местной вытяжной вентиляции участка ГЛС регулируется таким образом, чтобы она составляла 80-90% от производственной системы проточной вентиляции. Очистку вытяжного воздуха осуществляют через фильтры тонкой очистки. 
  
7.Приготовление воды 
  
Процесс приготовления воды включает следующие стадии: 
приготовление воды очищенной; 
приготовление воды для инъекций; 
  
7.1.Приготовление воды очищенной 
  
Очищенную воду получают в дистилляторе и собирают в аппаратах-сборниках вместимостью 0.25 м 3 . каждый. Отбирают пробу и определяют ее соответствии предъявляемым требованиям. 
  
7.2.Приготовление воды для инъекций 
  
Очищенную воду из аппарата-сборника с помощью сжатого воздуха давлением 0.14-0.22 Мпа передают на установку получения воды для инъекций (УВ), предназначенную для многоступенчатой очистки воды от примесей. Удельное сопротивление воды для инъекций должно составлять 2-10 МОм. В результат очистки получают воду для инъекций, которую собирают в приемниках-емкостях вместимостью каждый по 0.07 м 3 . Полученная вода для инъекция должна соответствовать требованиям ФС 42-2620-97. Из приемных емкостей воду с помощью сжатого воздуха давлением 0.14-0.22 МПа передают в моечную машину для окончательного ополаскивания полости ампул. Из установки получения воды для инъекций (УВИ) отбирают воду для приготовления 4%-го раствора гентамицина сульфата. 
Не реже одного раза в две недели проводят полный химический анализ воды для инъекций. 
8.Подготовка ампул 
  
Ампулы являются материалом первичной упаковки и должны пройти все виды обработки согласно нормам и правилам производства инъекционных препаратов 
Исходные ампулы вместимостью 2 см 3 предварительно отбраковывают, затем замачивают в мыльно-содовом растворе и выдерживают в течение 3 часов. После окончания выдержки ампулы ополаскивают питьевой водой и передают на мойку участка ГЛС. 
Мойку ампул осуществляют в моечной машине (ММ) шприцевым методов с однократной загрузкой (54) ампулы в соответствии с выбранной программой. 
С помощью моечной машины осуществляют внутреннюю мойку ампул водой очищенной, паром и водой для инъекция и наружного ополаскивания очищенной водой в течении 10-15 с . 
Давление сжатого воздуха, пара и воды должно быть не менее 0.14 МПа. 
Из приемных емкостей воду для инъекций с помощью сжатого воздуха давлением 0.14 Мпа подают в моечную машину для окончательного ополаскивания внутренней полости ампул. 
После мойки ампулы укладываются в кассеты и передаются на стерилизацию. Стерилизация осуществляется сухожаровым способом при температуре 120 градусов в течение 60 минут. 
После стерилизации остывшие ампулы выборочнуо контролируют на содрежание механических частиц. После проведения контроля ампулы передаются на установку розлива и запайки (УРЗ) 
  
9.Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата. 
  
Процесс получения 4%-го раствора гентамицина сульфата включает следующие основные операции: 
растворение субстанции гентамицина сульфата; 
подготовка установки стерилизации фильтров; 
предварительная фильтрация. 
  
9.1.Растворение субстанции гентамицина сульфата. 
  
В колбу (КВ-1) вместимостью 0.5 дм 3 из установки получения воды для инъекций с помощью шприца заливают воду для инъекций в объеме 200 см 3 . Колбу помещают на магнитную мешалку. При перемешивании загружают стабилизаторы-наполнители в количестве: 
натрий пиросернокислый – 1.6 гр; 
трилон Б – 0.05 гр. 
  
Перемешивают до полного растворения. После этого загружают субстанцию гентамицина сульфата в количестве 20 гр и перемешивают в течение 5-10 минут. Затем доводят объем раствора в колбе до 335.4 см 3 водой для инъекций. 
  
Израсходовано на стадии суммарно 
  
Наименование полупродукта и сырья 	Содержание основного вещества,% 	Израсходовано 	
А. Сырье 	  	грамм 	грамм основного вещества 	
Гентамицина сульфат 	590 мкг/мл 	20 	11,8 	
Натрий пиросернокислый 	98 	1,6 	1,568 	
Трилон Б 	97 	0,05 	0,049 	
Вода для инъекций 	--------- 	313,75 	------------ 	
Итого: 	---------- 	335,4 	13,417 	

Получено на стадии суммарно : 

Наименование полупродукта и сырья 	Содержание основного вещества,% 	Израсходовано 	
А. Готовый продукт 	  	грамм 	грамм основного вещества 	
Гентамицина сульфат 	40000 мкг/мл 	325 	13,000 	
Б. Потери 	  	  	  	
Гентамицина сульфат 	40000 	10,4 	0,417 	
Итого: 	---------- 	335,4 	13,417 	
  
9.2.Подготовка установки стерилизующей фильтрации. 
  
Процесс предварительной фильтрации проводят на установке стерилизующей фильтрации   (УСФ-1) в ламинарном боксе (ЛБ-1) 
Фильтрующим материалом служат мембраны "Миллипор" с диаметром пор 0.45 мкм. 
Перед началом работы проверку целостности мембран и герметичность установки проводят согласно технологическим инструкциям по проведению стерилизующей фильтрации. После этого собранный фильтр стерилизуют в автоклаве при температуре 120 о в течении 30 минут и повторно проводят проверку на целостность мембран и герметичность установки. Она должна быть герметична. 

  
  
10.Предварительная фильтрация. 
  
К верхней резиновой трубке фильтра подсоединяют снабженную монтажом бутыль вместимостью 0.5 дм 3 . с раствором гентамицина сульфата. К нижней трубке фильтра подсоединяют стерильную бутыль вместимостью 1 дм 3 . С помощью сжатого воздуха создают давление 0.02Мпа и подают раствор на фильтрацию. 
После расходования жидкости в бутыли на ее место устанавливается другая бутыль вместимостью 1 дм 3 с водой для инъекций. С помощью сжатого воздуха в бутыли создается давление 0.02 Мпа и вытесняются остатки раствора гентамицина сульфата. Резиновая трубка пережимается зажимом Кохера и бутыль передается на стадию стерилизующей фильтрации гентамицина сульфата. Выход составляет 97%. 
  
11.Стерилизующая фильтрация 4%-го раствора гентамицина сульфата. 
  
Израсходовано на стадии суммарно: 
  
Полупродукт – 4% -й раствор гентамицина сульфата 
Содержание основного вещества   - 40000 мкг/см 3 
  
Израсходовано: 
            грамм – 325 
               грамм основного вещества – 13.00 
               объем, дм 3 – 0.325 
  
Получено на стадии суммарно: 
  
Полупродукт – стерильный 4%-й раствор гентамицина сульфата. 
Содержание основного вещества – 40000 мкг/см 3 . 
Получено: 
               грамм – 308 
               грамм основного вещества – 0.32 
               объем, дм 3 – 0.008 
  
Б. Потери 4%-го раствора гентамицина сульфата после предварительной и стерилизующей фильтрации 
  
Содержание основного в-ва – 40000 мкг/см 3 . 
Получено: 
               грамм – 8 
               грамм основного вещества – 0.32 
               объем, дм 3 – 0.008 
  
Пробы 4%-го раствора гентамицина сульфата на анализ: 
  
Содержание основного вещества – 40000 мкг/см 3 
Получено: 
               грамм – 9 
               грамм основного в-ва – 0.36 
               объем, дм 3 – 0.009 
  
Итого: 
               грамм – 325 
               грамм основного вещества – 0.36 
               объем, дм 3 – 0.325 
  
Процесс стерилизации включает в себя следующие основные стадии: 
подготовка установки стерилизующей фильтрации; 
проведение процесса стерилизующей фильтрации. 
  
11.1.Подготовка установки стерилизующей фильтрации 
  
Фильтрующим материалом в фиьлтрах служат мембраны "Миллипор" с диаметром пор 0.22 мкм 
  
11.2.Проведение процесса стерилизующей фильтрации 
  
После окончания процесса отбирают с соблюдением асептики пробы для определения стерильности, механических включений и концентрации активного компонента, затем передают бутыль со стерильным 4%-ным раствором гентамицина сульфата на стадию розлива препарата в ампулы 
Полученный 4%-го раствор гентамицина сульфата должен быть стерильным и не содержать механических включений. Активность раствора должна составлять 40000. Результаты анализа отражают в технологическом журнале. 
Выход на этой стадии составляет 91.7%. 
  
Параметры режима и безопасности технологического процесса 
  
Наименование стадии, операции: 	Стерилизующая фильтрация 4%-го раствора гентамицина сульфата 	
Наименование аппарата: 	Установка стерилизующей фильтрации 	
Наименование элемента операции (работы): 	Фильтр с диаметром пор 0.22 мкм 	
Давление, МПа: 	0.018 	

  
12.Розлив препарата в ампулы и запайка 
  
Полупродукт – стерильный 4%-й раствор гентамицина сульфата 
Содержание основного вещества, % - 40000 мкг/см 3 
Израсходовано, гр. – 308 
Грамм основного вещества – 12.32 
Объем, дм 3 – 0.308 
Ампулы – 139 штук 
  
Процесс розлива препарата в ампулы включает следующие основные операции: 
подготовка установки розлива и запайки; 
проведение процесса розлива и запайки. 
  
12.1.Подготовка установки розлива и запайки 
  
Подготовку установки розлива и запайки проводят в следующей последовательности: 
  
протирают наружную часть установки безворсовой тканью, смоченной раствором этилового спирта объемной доли 76%, профильтрованной через мембранный фильтра с диаметром пор 0.45 мкм; 
промывают дозатор путем прокачки водой для инъекций; 
заполняют дозатор этиловым спиртом, профильтрованным через мембранный фильтр с диаметром пор 0.22 мкм и оставляют на 1.5-2 часа. 
  
Перед началом работы спирт сливают путем прокачки и затем промывают с соблюдением асептики установку 
  
12.2.Проведение процесса розлива и запайки 
  
После завершения подготовки операций включают установку и зажигают горелки. Затем стерильно подсоединяют к штуцеру дозатор бутыли со стерильным 4%-ным раствором гентамицина сульфата, снабженную монтажом 
В момент подсоединения на расстоянии 0.5 м от штуцера дозатора ставят зажженную спиртовую горелку. 
Кассету со стерильными ампулами устанавливают на наклоненный лоток. Ампулы, скатываясь по наклонной плоскости заполняют поворотный стол. При образовании заторов включается вибратор. Процесс розлива и запайки проводится в токе азота. В процесса работы установки контролируется объем дозирования в ампулы, давление кислорода, пропана, азота. В каждую ампулу разливается по 2.15 см 3 препарата. Результаты контроля вносятся в технологический журнал. Ампулы, выходя из механизма подачи, заполняют пустую кассету, заполненную кассету передают на стерилизацию, а на ее место ставят пустую. 
После завершения работы по розливу и запайке ампул дозатор промывают водой для инъекций, заполняют этиловым спиртом. Полученную серию ампул маркируют и анализируют на содержание примесеей. 
Выход на данной стадии составляет 90.9%. 
  
13.Стерилизация ампул с препаратом 
  
Стерилизация ампул с препаратом осуществляется в автоклаве проходном при температуре 120 о С и давлении 0.12 МПа в   течении 30 минут. 
  
14.Проверка ампул на герметичность 
  
После стерилизации ампулы опускают в ванну с водой, подкрашенной 0.0005% раствором метиленового синего, перемешивают ампулы в течении 5 минут, переносят в ванную с питьевой водой для ополаскивания. Ампулы с препаратом должны быть герметичны 
  
15.Просмотр ампул 
  
Непосредственно перед просмотром ампулы промывают в горячей воде и ополаскивают. Ампулы после визуального осмотра переносят в инспекционную машину и просматривают на белом и черном фонах 
Отбраковку готового продукта осуществляют по следующим показателям: 
наличие механических включений; 
наличие нагара на капилляре ампулы; 
наличие трещин. 
  
От просмотренной партии отбирают 15% ампул для проведение анализа на соответствие требованиям ФС 42-3709-99. Кассеты, прошедшие контроль,   передают на маркирование. Выход на данной стадии составляет 90.2% 
  
16.Оформление готовой продукции 
  
Процесс оформления включает в себя следующие операции: 
маркировка ампул; 
упаковка ампул во вторичную тару; 
контрольное хранение; 
хранение готовой продукции. 
На каждой ампуле быстрозакрепляющейся краской наносят надпись, в которой указано название препарата, его концентрация, номер серии 
По 10 ампул упаковывают в коробки из картона и лист-вкладыш. На этикетке указывают название, предприятие-изготовитель, товарный знак, штрих-код, способ применения. 
Контрольное хранение проводят при температуре 6 о С в течение 14 суток до получения результатов анализа готового продукта. 
Упакованные в транспортную тару ампулы с препаратом хранят в защищенном от света месте при комнатной температуре. 
Выход на данной стадии составляет 83.3% 

17.Список использованной литературы 
  
Регламент "Получение 4%-го раствора гентамицина сульфата" 
Регламент "Ампульное производство 4%-го раствора гентамицина сульфата"